男人的天堂一区二区视频在线观看-男人的天堂亚洲-男人的天堂天堂网-男人的天堂视频在线观看-91综合在线-91综合视频

您好!歡迎訪問上海奇宜儀器設備有限公司網(wǎng)站!
全國服務咨詢熱線:

13296018069

當前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 缺氧對GDH活性的影響 Presens搖瓶培養(yǎng)物中的氧監(jiān)測

缺氧對GDH活性的影響 Presens搖瓶培養(yǎng)物中的氧監(jiān)測

更新時間:2023-01-10  |  點擊率:1784

image.png杯墊CFG上方的搖瓶用于讀取光學傳感器

     研究了不同栽培條件下谷棒狀桿菌和兩種不同白喉棒狀桿菌培養(yǎng)物中缺氧的影響。進行實驗以表征低氧濃度對氮代謝的特定酶 - 銨轉(zhuǎn)移酶谷氨酸脫氫酶(GDH)的影響。Oxgyen監(jiān)測使用PreSens的氧氣儀Fibox 3進行。所有測試的棒狀桿菌培養(yǎng)物的生長速率取決于氧氣供應,并且可用的氧氣越多,生長速率就越高。所研究的GDH活性似乎不受谷氨酸C.低氧水平的影響。在白喉衣原體培養(yǎng)物中,GDH活性在某些條件下增加,但只能確定非常低的活性值,這可能不顯著。

     銨的同化,被稱為谷氨酸C.的氮源,主要通過NADPH依賴性谷氨酸脫氫酶(GDH)完成。該酶將銨轉(zhuǎn)化為L-谷氨酸,這使得GDH成為一種生物技術(shù)上重要的酶,因為食品工業(yè)需要大量谷氨酸作為增味劑。因此,一個目標是提高GDH的效率。在谷氨酸梭菌和白喉梭菌等需氧細菌中,氧限制會影響新陳代謝,也可能損害GDH活性。在T. Müller[2]先前的研究中,可以觀察到在氧氣排除下谷氨酸C. gdh的轉(zhuǎn)錄減少。以下實驗進一步研究了缺氧對谷氨酸衣原體和白喉梭菌培養(yǎng)物生長速率、GDH活性和GDH轉(zhuǎn)錄的影響。測試具有不同培養(yǎng)體積和振蕩速度的不同培養(yǎng)條件。Fibox 3與化學光學氧傳感器一起用于在整個培養(yǎng)期間培養(yǎng)物中的非侵入性氧監(jiān)測。

材料與方法

    實驗使用300 mL擋板玻璃搖瓶,其中一些在內(nèi)底壁上附有氧傳感器點(PreSens)。杯墊CFG是一個適配器,放置在傳感器點正對面的搖瓶下方,并通過PreSens連接到氧氣計Fibox 3以讀取傳感器響應。在整個培養(yǎng)過程中以30秒的采樣率監(jiān)測和記錄氧氣濃度。本研究使用了谷氨酸梭菌ATCC13032野生型菌株和兩種白喉梭菌野生型菌株DSM44123和DSM43988[1]。為了檢查不同培養(yǎng)條件下的耗氧差異,在125 rpm的振蕩速度下,體積為25 mL、50 mL和100 mL,并在100 rpm和150 rpm的振蕩速度下測試了另外兩種50 mL體積的培養(yǎng)物。對于每一系列測試,在搖瓶中接種四個平行培養(yǎng)物。在每個系列中,取三個15mL樣品,每個樣品來自單獨的培養(yǎng)容器,用于谷氨酸脫氫酶活性測量和RNA雜交:0.5小時,2.5小時和6.5小時后。剩余的搖瓶裝有用于氧氣監(jiān)測的傳感器點。gdh DNA片段通過集落PCR擴增,隨后通過凝膠電泳純化,并用NucleoSpin®提取物試劑盒(Macherey-Nagel,Düren)提取。GDH活性按照T. Müller[2]的描述進行測量,并用以下公式計算:

活動 = (ΔA x V) / (ε x t x m x d)

     Delta A是吸光度降低,V是總反應體積。Epsilon是消光系數(shù),t是反應時間,m蛋白在反應混合物中(mg)和d層厚度。用Roti-Quant®在oD下測量反應混合物中的蛋白質(zhì)595.使用NucleoSpin® RNA II-Kit (Macherey-Nagel, Düren)進行總RNA的分離。標記的RNA探針的合成和RNA雜交按照E. H?nssler的描述進行[3]。

圖1:不同體積(A)和不同振蕩速度(B)的谷氨酸梭菌培養(yǎng)物的氧濃度和oD。

圖2:谷氨酸梭菌培養(yǎng)物中的氧濃度和GDH活性(A);白喉衣原體DSM44123和DSM43988培養(yǎng)物中GDH活性的比較(B)。

氧氣消耗和增長率

       將培養(yǎng)0.5、2.5和6.5小時的氧氣水平與當時的光密度進行比較(圖1)。可以觀察到,谷氨酸衣原體和白喉衣原體的生長速率取決于氧氣供應。不同的條件,如不同的振蕩速度和培養(yǎng)量,導致氧氣供應的變化。總之,可用的氧氣越多,生長速度就越高,與已知的數(shù)據(jù)相匹配。在培養(yǎng)快速生長的細菌(如谷氨酸梭菌)時,監(jiān)測生長速率和氧氣濃度的相關性非常重要。因為,例如,與以125 rpm搖動的培養(yǎng)物相比,用150 rpm搖動的谷氨酸C. glutamum培養(yǎng)物顯示出更低的氧氣水平,但OD更高,這可能導致氧氣隨著時間的推移而耗盡。像白喉梭菌這樣生長緩慢的細菌的耗氧量非常低,因此它幾乎與氧氣輸入保持平衡。在所有系列實驗中,耗氧量都超過了氧氣輸入,濃度降低。沒有系列達到氧氣限制。

缺氧對GDH的影響

      比較谷氨酸C. glutamum的GDH活性和氧氣消耗沒有顯示出很強的相關性(圖2A);氧氣的減少導致GDH活性的強弱下降。此外,在氧氣減少與gdh轉(zhuǎn)錄本量之間沒有顯著相關性。GDH活性的降低在6.5小時內(nèi)為0.25-0.7U / mg。這些值非常低,可能是由波動或其他調(diào)節(jié)過程的結(jié)果引起的。然而,不能排除氧氣消耗對GDH活性的影響。與谷氨酸衣原體相比,在某些培養(yǎng)條件下,在白喉梭菌的兩個菌株中都可以觀察到GDH活性略有增加(圖2B)。但是測量值真的很低,可能并不重要。兩種白喉菌株培養(yǎng)過程中氧濃度均或多或少降低,GDH活性均增加和降低。白喉衣原體DSM44123的斑點印跡顯示轉(zhuǎn)錄本增加(25mL / 125rpm除外),這與GDH活性測量無關。這可能表明谷氨酸脫氫酶在轉(zhuǎn)錄后受到調(diào)節(jié)。白喉梭菌DSM43988菌株中的斑點印跡和GDH活性測量或多或少匹配,但與白喉梭菌DSM 44123獲得的結(jié)果不匹配。由于兩種菌株的結(jié)果不同,無法得出關于缺氧對白喉衣原體GDH的影響的明確結(jié)論。

結(jié)論與觀點

       在測試的培養(yǎng)條件下,在谷氨酸衣原體和白喉衣原體的培養(yǎng)物中,氧濃度對GDH活性沒有一定的影響。由于只能測量非常低的GDH活性值,因此必須使用大量蛋白質(zhì)進行進一步的測試。谷氨酸梭菌培養(yǎng)的結(jié)果并未證實在T. Müller研究中觀察到的預期影響[2]。其他條件可能必須進行測試,例如以更低的搖晃速率或不搖晃進行栽培。由于氧氣的減少有望降低GDH活性,因此相反的方法 - 額外的氧氣輸入 - 可以提供更詳細的見解。這些新方法可能會為GDH活性測量提供更好或更顯著的結(jié)果


掃一掃,關注微信
地址:上海市銀都西路58號A座A226
©2025 上海奇宜儀器設備有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備14049122號-4
欧美黑人一级二级巨大久久天堂 | 激情欧美成人小说在线视频| 亚洲精品AⅤ在线观看| 久久久久久伊人高潮影院| 97在线无码免费人妻短视频| 入戏太深动漫未删减在线观看| 国产裸体裸美女无遮挡网站| 亚洲一区二区三区乱码AⅤ| 女女互揉吃奶揉到高潮AV| 大地韩国日本HD免费完整| 亚洲AV无码成人片在线观看| 老奶奶BGMBGM人与自然| 白丝制服被啪到喷水很黄很暴力| 无码人妻一区二区三区免水牛视频 | ASS中国人体欣赏PICS| 少妇无码AV无码专区线| 精品国产AⅤ无码一区二区蜜桃| 中文字幕精品亚洲无线码一区应用 | 精品日产卡一卡二卡927| 97精品伊人久久大香线蕉 | 妺妺窝人体色www婷婷| 二男一女一起日B| 亚洲精品97久久中文字幕无码| 女人自熨全过程直播| 国产成人一区二区三区APP| 亚洲午夜无码毛片Av| 人妻无码一区二区三区TV| 国产一区二区精品丝袜| 中文字幕伊人久久| 熟女丝袜香蕉双人女高潮| 精品一区二区三区无码视频| 无码人妻久久久久一区二区三区91 | GOGO全球大胆高清人体131| 偷窥少妇久久久久久久久| 久久久WWW影院人成_免费| 被村长狂躁俩小时玉婷| 亚洲METART人体欣赏| 欧美xxxxx视频| 国产乱子伦一区二区三区| 中文无码热在线视频| 四虎成人WWW成人影院| 久久人人97超碰CAOPORE| 动漫人物桶动漫人物免费观看网站| 亚洲国产精品一区二区久久HS | 亚洲无亚洲人成网站77777| 人人妻人人澡人人| 好男人WWW在线影院官网| ASS年轻少妇PIC精品| 亚洲6080YY久久无码产自国| 女人被狂躁高潮啊的视频在线看| 国产激情久久久久影院小草| 尤物TV国产精品看片在线| 天干天干啦夜天天喷水| 裸体丰满白嫩大尺度尤物| 国产成人一区二区三区视频免费| 真实的国产乱XXXX在线| 无码AⅤ最新AV无码专区| 蜜臀AV在线播放| 国产欧美国产综合每日更新| 99久久久精品免费观看国产 | 初尝黑人嗷嗷叫中文字幕| 亚洲天天做日日做天天欢| 日韩欧美人妻一区二区三区 | 国产精品久久国产精品99盘| 在线观看高H无码黄动漫| 无码精品人妻一区二区三区在线 | 精品三级久久久久电影我网| 成人A毛片免费全部播放| 亚洲日韩国产AV无码无码精品| 日韩一区二区无码视频| 久久久久亚洲AV成人无码| 国产粉嫩馒头无套内在线观看免费 | 国产无套码AⅤ在线观看| AV极品无码专区亚洲AV| 亚洲国产成人极品综合| 日本少妇人妻XXXXX18| 久久无码中文字幕免费影院蜜桃| 国产福利精品一区二区| 99热这里只有精品免费播放| 亚洲精品国产AV天美传媒| 色老99久久九九爱精品| 美国ZOOM人与ZOOM| 国产作爱视频免费播放| 成人午夜精品久久久久久久| 影音先锋熟女少妇AV资源| 小洁和公H文翁17| 日本免费一区二区三区最新VR | 教室抽插调教老师小说| 丰满岳跪趴高撅肥臀| 16ⅤIDE0SEX性欧| 亚洲精品乱码久久久久久| 熟女系列丰满熟妇AV| 欧美丰满美乳XXⅩ高潮| 久久99精品国产99久久6男男| 国产JJIZZ女人多水| BGMBGMBGM成熟交| 野花日本大全免费观看版动漫| 无码人妻一区二区三区麻豆| 人人妻人人澡人人爽欧美一区| 老赵抱着媛媛在厨房做| 好紧我太爽了视频免费国产| 东北小伙二十厘米粗大硬 | 精品亚洲国产成人AV在线| 国产成人亚洲精品无码AV大片 | 久久精品无码免费不卡| 国产美女在线精品免费观看 | 毛豆日产精品卡2卡3卡4卡免费| 国产一区二区波多野结衣| 放在里面边顶边吃饭H| AV一本大道香蕉大在线| 一边做饭一边暴躁怎么办| 亚洲AV色香蕉一区二区| 少妇人妻AV毛片在线看| 欧美性爱XXXX黑人| 理论片午午伦夜理片影院| 激情综合色五月丁香六月亚洲| 国产激情久久久久影院老熟女免费| 把腿张开老子CAO烂你| 做AJ的视频大全电视剧 | 无码人妻久久一区二区三区不卡| 日本高清视频色WWWWWW色| 男按摩师舌头伸进去了| 久久久久久精品免费免费英国| 国色精品卡一卡2卡3卡4卡免费| 国产成人精品人人| 成人免费无码大片A毛片小说| AV天堂亚洲国产AV| 中文字幕不卡乱偷在线观看 | 国产拍揄自揄免费观看| 公交车被CAO得合不拢腿视频| СЕКС日本ВИДЕ视频| 97精品伊人久久大香线蕉app| 伊人久久大香线蕉AV网禁呦| 亚洲欧美偷拍内射白浆| 亚洲AV伊人久久青青草原视色| 铜铜铜铜铜铜铜好大好深色板| 三个男人让我爽了一夜| 人妻体内射精一区二区| 欧美精品天堂一区二区不卡 | 亚洲精品在看在线观看| 亚洲AVSSS在线观看| 无码专区永久免费AV网站| 四川丰满少妇A级毛片| 日韩欧美群交P片內射中文| 人妻少妇看A偷人无码精品| 欧美国产日本高清不卡| 男男19禁啪啪无遮挡免费 | 豪妇荡乳1一5潘金莲2在线| 国产精品毛片无码| 国产成人无码精品一区二区三区| 嗯~使劲~别停~高H漫画| 成人免费毛片内射美女-百度| 爆乳女教师 高清BD| ているの天堂资源WWW| TPU色母能与PA6色母通用吗| BT天堂А√天堂资源地址| 9L国产精品久久久久尤物| 47147人文艺术欣赏| 4HUWWW四虎永久免费| 377人体粉嫩噜噜噜| 91精品人妻一区二区三区| 337P粉嫩日本欧洲亚洲大胆艺 | 亚洲精品乱码久久久久久蜜桃| 亚洲成AⅤ人的天堂在线观看女人 亚洲成A∨人片在线观看不卡 | 亚洲色无码专区一区| 亚洲人成自拍网站在线观看| 亚洲精品永久在线观看| 亚洲人妻免费视频| 亚洲日韩在线成人AV电影网站| 亚洲人成无码网站在线观看野花| 亚洲人成亚洲人成在线观看| 亚洲熟妇无码AV不卡在线播放| 亚洲人成人无码WWW影院| 亚洲人成无码WWW久久久| 亚洲综合久久成人AV| 曰韩无码AV片免费播放不卡| 中国高清WINDOWS视频软件| 18禁美女黄网站色大片在线| 91久人人做人人妻人人玩精品 | 亚洲日韩AV无码一区二区三区人| 亚洲人成在线观看无码| 艳妇臀荡乳欲伦69调教视频 | 亚洲丁香婷婷久久一区二区| 亚洲精品无码久久久久苍井空| 亚洲日韩一页精品发布| 又硬又粗又大一区二区三区视频| 真人无码作爱免费视频禁HNN| 18一20亚洲GAY无套| JAPANESE酒醉侵犯| 成人网站在线观看丰满少妇电影| 寡妇大J8又粗又大| 国产精品午夜小视频观看| 韩国青草无码自慰直播专区| 精品人妻AV一区二区三区不卡| 久久婷婷综合色丁香五月| 妺妺窝人体色7777777| 欧美亚洲国产精品久久高清| 任你躁久久精品6| 他的舌头含有起了我的小豆豆| 小东西才几天没做喷的到处都是|